|
|
Vývoj UHPLC-MS/MS metody vhodné ke stanovení cabozantinibu v krevním séru
Kleinová, Jana ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Hraníček, Jakub (oponent)
The aim of this Bachelor thesis was to develop a UHPLC-MS/MS method for the determination of Cabozantinib in blood serum. This method was used to monitor the release of the active substance in a model organism - the rat. First, the mass spectrometer setup was optimized, where MRM transitions for Cabozantinib and isotope-labelled Cabozantinib-D4 were found. For Cabozantinib, an MRM transition of 502.2 → 323.1 was found with optimal energy levels of Q1 = -26.0 V, CE = -40.0 V and Q2 = -22.0 V. For Cabozantinib-D4, the MRM transition of 506.2 → 327.0 was found with optimal energy levels being Q1 = -26.0 V, CE = -39.0 V and Q2 = -22 V. The method setup parameters were as follows: The chromatography column used was a Poroshell 120 EC-C18, 2.1x50 mm, 1.9 um, (Agilent Technologies). The mobile phase consisted of acetonitrile (B) and formic acid (A), the flow rate of the mobile phase was 0.350 ml/min, the analysis time was 5.5 min and the injection volume was 1 μl at gradient elution (time: 0; 0.5; 2.0; 3.0; 3.5; 4.0; 5.5 min, B: 10; 10; 60; 100; 10; 10 %). The method was linear (weighted regression 1/x2 ) with a regression coefficient equal to 0.9978, showing an excellent linearity of the method. The precision (relative standard deviation) of the method was within 14 %. The accuracy (relative error) was...
|
|
|
Vliv protinádorového léčiva cabozantinibu na aktivitu cytochromů P450
Slobodníková, Eva ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Václavíková, Radka (oponent)
Cabozantinib je protinádorové léčivo používané zejména pro léčbu karcinomu štítné žlázy a ledvinových buněk. Řadí se mezi nízkomolekulární selektivní inhibitory tyrosinkinas. Tyrosinkinasy mají klíčovou roli při přenosu signálů a regulaci řady buněčných procesů, jako je růst, diferenciace a proliferace. Změny v tyrosinkinasových dráhách jsou spojeny se vznikem a progrese nádorů, kde dochází k jejich nekontrolovatelnému růstu. Inhibitory tyrosinkinas působí na tyrosinkinasové receptory, čímž zabraňují dělení nádorových buněk a zároveň zpomalují progresi nádorového onemocnění. Jelikož cabozantinib, stejně jako většina klinicky používaná léčiva, podléhá metabolismu cytochromy P450, může dojít k nežádoucím lékovým interakcím, které mají za následek změnu farmakokinetiky podávaných léčiv, a následné snížení účinnosti těchto léčiv. V této diplomové práci byl sledován účinek cabozantinibu na aktivitu hlavních enzymů I. fáze biotransformace xenobiotik, cytochromů P450, in vitro. Studován byl účinek na aktivitu potkaních i lidských izoforem cytochromů P450, které se účastní metabolismu xenobiotik. Izoformy CYP byly převážně inkubovány s cabozantinibem o dvou koncentracích; 10 µM a koncentraci odpovídající koncentraci substrátu ve specifické markerové reakci. Výsledky prokázaly inhibiční vliv cabozantinibu u...
|
|
|
Vliv potkaních enzymů na metabolismus tyrosinkinasových inhibitorů in vitro a in vivo
Škriabová, Simona ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Ptáčková, Renata (oponent)
Inhibitory tyrosinkinas jsou malé molekuly perorálně dostupných, dobře tolerovaných a celosvětově schválených léků pro léčbu několika typů nádorů. Mezi tyto léčiva patří vandetanib, cabozantinib a lenvatinib, které se využívají pro léčbu rakoviny štítné žlázy. Vandetanib a cabozantinib jsou léčiva schválená pro léčbu medulárního karcinomu štítné žlázy a lenvatinib je schválený pro léčbu diferencovaného karcinomu štítné žlázy. V předkládané diplomové práci byl studován in vitro a in vivo metabolismus vandetanibu, cabozantinibu a lenvatinibu. Pro studium in vitro metabolismu byly použité mikrosomy izolované z jater potkanů premedikovaných pregnenolonkarbonitrilem a pro studium in vivo metabolismu byly použity vzorky plasmy a moči potkanů premedikovaných jednotlivými tyrosinkinasovými inhibitory. Vzniklé metabolity byly analyzovány vysokoúčinní kapalinovou chromatografii a následně identifikovány pomocí metody hmotnostní spektrometrie. Při studiu in vitro metabolismu, kdy byly ke vzorkům přidané NADPH a kofaktory (kyselina glukuronová a glutathion) bylo zjištěno, že se u všech třech léčiv tvořilo nejvíce metabolitů při delší době inkubace a zároveň bylo zjištěno, že kyselina glukuronová a glutathion mohou ovlivňovat strukturu, vlastnosti a funkce enzymu CYP3A4. Během in vivo experimentu byly v této...
|
|
|
Přeměna cabozantinibu enzymy první fáze biotransformace
Jurečka, Tomáš ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Kubíčková, Božena (oponent)
Cabozantinib je protinádorové léčivo, které inhibuje tyrosinkinasy zprostředkovávající signalizační dráhy důležité pro růst a vývoj nádorů. Je používán pro léčbu medulárního karcinomu štítné žlázy, hepatocelulárního karcinomu a karcinomu ledvin. Hlavními enzymy první fáze biotransformace, kterými je katalyzována přeměna cabozantinibu, jsou cytochromy P450. V diplomové práci byl studován metabolismus cabozantinibu a cytochromy P450 podílející se na tomto metabolismu. V práci byly pro studium metabolismu cabozantinibu používány jaterní mikrosomy potkana, myši a králíka. Rovněž byl sledován vliv jednotlivých izoforem cytochromů P450 na metabolismus cabozantinibu za použití potkaních mikrosomů. Studována byla také časová závislost přeměny cabozantinibu jaterními mikrosomy potkana. Zahrnuto bylo také studium enzymové kinetiky přeměny cabozantinibu jaterními mikrosomy potkana a studium vlivu inhibitorů cytochromů P450 na tento metabolismus. Metabolity byly analyzovány pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a hmotnostní spektrometrie. Tvorba metabolitů cabozantinibu rostla s časem inkubace až do 30. minuty, u některých metabolitů až do 40. minuty. Během experimentů bylo detekováno až pět metabolitů cabozantinibu (M1, desmethylcabozantinib, M3, monohydroxycabozantinib a N-oxid cabozantinibu)....
|
|
|
Studium působení tyrosinkinasových inhibitorů a jejich metabolitů na buněčné linie nádorů
Kolárik, Matúš ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Vinklářová, Lucie (oponent)
Vandetanib, lenvatinib a cabozantinib jsou inhibitory receptorových tyrosinkinas schválené k terapii lokálně pokročilých a metastázujících nádorů štítné žlázy, ledvin a jater. Tyto multikinasové inhibitory inhibují fosforylaci tyrosinových zbytku proteinů, čímž ovlivňují buněčnou signalizaci v nádorových buňkách. Metabolity vandetanibu, lenvatinibu a cabozantinibu byly detekovány in vitro i in vivo v séru a moči. Cytochromy P450 (CYP) a flavinové monooxygenasy byly identifikovány jako klíčové enzymy přeměňující výše zmíněné léky. Literatura poskytuje pouze limitované informace o farmakologické účinnosti metabolitů vandetanibu, lenvatinibu a cabozantinibu . Předkládaná diplomová práce se zabývala srovnáním farmakologické účinnosti výše uvedených tyrosinkinasových inhibitorů a jejich metabolitů, N-oxidů, k čemuž bylo využito sledování vlivu na viabilitu buněk v normoxických i hypoxických podmínkách. Dále byl pomocí "western blottingu" i průtokové cytometrie zkoumán vliv na expresi enzymů první fáze biotransformace xenobiotik (CYP 450 1A1, 1B1, 3A4 a CYP 450 oxidoreduktasy) i receptorových tyrosinkinas RET a VEGFR2, včetně mechanismů změn exprese těchto proteinů. V neposlední řadě bylo pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) zkoumáno, zda probíhá v použité buněčné linii metabolismu...
|
|
|
Vliv protinádorových léčiv na expresi a aktivitu cytochromů P450 podrodiny 2C
Uher, Tomáš ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Feglarová, Tereza (oponent)
Metoda cílené terapie, založená na blokování metabolických drah důležitých pro růst, proliferaci a migraci tumorových buněk je v poslední době aplikována u mnoha druhů rakovinových onemocnění. Příkladem takového léčiva je cabozantinib, perorálně podávaný nízkomolekulární inhibitor tyrosinkinasových receptorů, regulující růst, angiogenezi a metastázi progresivních medulárních karcinomů štítné žlázy. Cíleně působící léčiva doplňují v rámci nádorové léčby cytostatika, mezi které patří ellipticin. Použití této látky v klinické praxi je nicméně omezeno její nízkou rozpustností a množstvím škodlivých účinků. V rámci této bakalářské práce byl studován vliv jednorázového podání cabozantinibu, ellipticinu či jejich kombinace na genovou a proteinovou expresi cytochromů P450 2C6 a 2C11 in vivo, významných biotransformačních enzymů v játrech potkana. Proteinová exprese byla zkoumána metodou Western blot s imunodetekcí, genová exprese byla stanovena prostřednictvím kvantitativní PCR. Zároveň byla určena enzymová aktivita CYP2C6 metodou 4'-hydroxylace diklofe- naku, aktivita CYP2C11 metodou 16α-hydroxylace testosteronu. V neposlední řadě byl studován přímý inhibiční účinek cabozantinibu na enzymovou aktivitu rekombi- nantní potkaní izoformy CYP2C11, in vitro. Bylo zjištěno, že exprese CYP2C6 a CYP2C11 v jaterní...
|
|
|
Studium vzájemného působení inhibitoru tyrosinkinas cabozantinibu a cytotoxického alkaloidu ellipticinu na expresi a aktivitu cytochromů P450 1A1, 1A2 a 1B1
Měkotová, Barbora ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Jeřábek, Petr (oponent)
Inhibitory tyrosinkinas jsou v posledních letech stále více využívány pro cílenou léčbu rakoviny, a to díky jejich schopnosti blokovat intracelulární signalizační dráhy, které jsou spojované s vývojem nádorů. Do této skupiny látek patří cabozantinib, který byl schválen pro léčbu karcinomu štítné žlázy a vykazuje účinnost proti několika dalším typům nádorových onemocnění. V protinádorové terapii se však velmi často používá kombinace více léčiv, což může mít za následek jejich vzájemné interakce zprostředkované cytochromy P450, které hrají hlavní roli v jejich metabolismu. Ačkoli tak může dojít k ovlivnění terapeutického účinku a vzniku nežádoucích účinků na organismus, nebylo doposud o vlivu cabozantinibu na biotransformační enzymy mnoho známo. V rámci této práce byl proto studován vliv cabozantinibu nejen samotného, ale také v kombinaci se známým cytostatikem ellipticinem na expresi a aktivitu cytochromů P450 1A1, 1A2 a 1B1 v játrech a ledvinách potkanů in vivo. Pomocí kvantitativní PCR byla nejprve stanovena genová exprese, míra exprese samotného proteinu byla sledována prostřednictvím metody Western blot s následnou imunodetekcí. Specifická aktivita byla sledována za použití specifických markerových reakcí, O-deethylace 7-ethoxyresorufinu pro CYP1A1, O-demethylace 7-methoxyresorufinu pro CYP1A2 a...
|
|
|
Metabolismus tyrosinkinasového inhibitoru cabozantinibu jaterními mikrosomy potkana
Jurečka, Tomáš ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Mrízová, Iveta (oponent)
Cabozantinib je protinádorové léčivo, které bylo schváleno pro léčbu progresivního karcinomu štítné žlázy organizacemi FDA i EMA. Cabozantinib působí jako tyrosinkinasový inhibitor. Blokuje receptory signálních drah důležitých pro růst nádorů. Předkládaná bakalářská práce rozšiřuje poznatky o metabolismu cabozantinibu. V práci je studován metabolismus cabozantinibu jaterními mikrosomy izolovanými z různých laboratorních zvířat (potkan, myš a králík) a vliv jednotlivých izoforem cytochromů P450 (CYP) na metabolismus cabozantinibu jaterními mikrosomy potkana. Práce zahrnuje rovněž optimalizaci metody separace metabolitů cabozantinibu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a následnou identifikaci pomocí hmotnostní spektrometrie. Za použití mikrosomů izolovaných z různých laboratorních zvířat byly detekovány až tři metabolity: M1, monohydroxycabozantinib a O-desmethylcabozantinib. Pomocí myších mikrosomů byl cabozantinib metabolizován především na O-desmethylcabozantinib a pomocí králičích mikrosomů především na monohydroxycabozantinib. Mikrosomy z kontrolních potkanů tvořily dva metabolity s převahou monohydroxycabozantinibu. Největší množství metabolitů bylo tvořeno mikrosomy potkanů premedikovaných PCN. Tyto výsledky tak naznačují důležitost cytochromů 3A podrodiny na metabolické...
|
|
|
Příprava protinádorových léčiv vázaných v apoferritinu
Fürbacherová, Pavlína ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Koblihová, Jitka (oponent)
Rakovina patří mezi nejzávažnější problémy, se kterými se potýká moderní medicína. V posledních letech došlo k velkému rozvoji nanotechnologií a jejich použití v medicíně. Cílem je zefektivnit podávání léčiv a přispět tak k léčbě nádorových onemocnění. Uložení látky do nanočástice může být řešením při nízké stabilitě léčiva a/nebo může přispět k eliminaci nežádoucích vedlejších účinků. Nanočástice apoferritin, která byla sledována v této bakalářské práci, je forma běžně se vyskytujícího proteinu ferritinu. V jeho struktuře se nachází dutina, do které je možné vložit požadované léčivo. Jeho chemické vlastnosti (vysoká stabilita při extrémních teplotách a široké škále pH, snadná manipulace pomocí změny pH) a také biokompatibilita z něj dělají potenciálně vhodný transportér. V předkládané bakalářské práci byla studována schopnost apoferritinu inkorporovat do své struktury protinádorové léčivo cabozantinib. Jedná se o tyrosinkinázový inhibitor 'používaný pro léčbu karcinomu štítné žlázy, ledvinových buněk a hepatocelulárního karcinomu. Dále byl sledován vliv konečné hodnoty pH na vznik komplexu apoferritinu s cabozantinibem a také stabilita tohoto komplexu. Ze získaných výsledků vyplývá, že apoferritin může enkapsulovat cabozantinib do své vnitřní struktury, přičemž konečná hodnota pH na tento proces...
|
host ::
RSS.